農(nóng)藥殘留檢測卡嚴格遵循國家標準GB/T 5009.199-2003《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測》、農(nóng)業(yè)部標準NY/T 448-2001及國家市場監(jiān)督管理總局快速檢測方法KJ 201710《蔬菜中敵百蟲、丙溴磷、滅多威、克百威、敵敵畏殘留的快速檢測》的相關(guān)規(guī)定。

1. 方法原理 (Principle)

農(nóng)藥殘留檢測卡本方法基于酶抑制法。膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸和靛酚（藍色）。有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶有特異性抑制作用，能抑制此催化水解過程，從而阻止或改變顏色變化。通過比較顏色變化程度，即可判斷樣品中上述兩類農(nóng)藥的殘留情況。

2. 適用范圍 (Scope)

適用于蔬菜、水果中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速篩查測定。

注：適用于有機蔬菜的初步篩查，但陽性結(jié)果需用法定仲裁方法進一步確認。

3. 檢測限 (Detection Limit)

可有效檢測有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留，其靈敏度（抑制率≥50%時）通常相當于國家標準（GB）中部分農(nóng)藥最大殘留限量（MRL）值水平。具體檢出限因農(nóng)藥品種而異。

4. 儀器與試劑 (Apparatus and Reagents)

4.1 儀器設(shè)備:

*  農(nóng)藥殘留速測卡（包含白色藥片-膽堿酯酶片和紅色藥片-底物片）

*  天平（感量0.1g）

*  取樣器或移液器

*  剪刀、鑷子

*  帶蓋樣品提取瓶

*  計時器

*（可選）37℃恒溫培養(yǎng)裝置

4.2 試劑:

配套緩沖溶液（提取液）

5. 樣品處理 (Sample Preparation)

(1) 取有代表性的樣品，擦去表面泥土。

(2) 將樣品剪成1cm3左右的小碎片。

(3)準確稱取5.0g剪碎的樣品于帶蓋提取瓶中。

(4)加入10.0mL緩沖溶液，蓋緊瓶蓋。

(5)用力振搖50次，然后靜置2分鐘以上，待用。

特殊樣品處理:

對于蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄等易產(chǎn)生假陽性的樣品，建議采用整株（體）蔬菜浸提或表面測定法（用緩沖液擦拭表面后取樣）以減少干擾。

對于含葉綠素較高的蔬菜，可采用整株（體）蔬菜浸提法以減少色素干擾。

6. 檢測步驟 (Testing Procedure)

(1)預(yù)反應(yīng):取一片速測卡，用白色藥片沾取樣品提取液（確保藥片充分濕潤）。在室溫下放置10分鐘進行預(yù)反應(yīng)。若使用恒溫裝置，則在37℃下放置10分鐘。

關(guān)鍵點: 預(yù)反應(yīng)后，白色藥片表面必須保持濕潤。

(2)空白對照:同時取一片速測卡，用白色藥片沾取純凈緩沖液，作為空白對照卡，操作與樣品卡完全相同。

(3)疊合反應(yīng):將預(yù)反應(yīng)后的速測卡對折，使紅色藥片與白色藥片緊密疊合。

(4)反應(yīng)計時: 用手捏緊（或放入恒溫裝置中）3分鐘，并開始計時。

7. 結(jié)果判定 (Result Interpretation)

在反應(yīng)完成3分鐘時立即觀察白色藥片的顏色變化。

陰性結(jié)果 (-): 白色藥片變?yōu)?*天藍色**或與空白對照卡的顏色相同。表示樣品中未檢出有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留，或殘留量低于方法檢測限。

陽性結(jié)果 (+): 白色藥片不變色或呈淺藍色。表示樣品中存在有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留，且其劑量已對酶產(chǎn)生抑制。

注意：

對陽性結(jié)果的樣品，應(yīng)使用氣相色譜（GC）或液相色譜（LC-MS/MS）等其它分析方法進行確證，以確定具體農(nóng)藥品種和準確含量。

結(jié)果判讀應(yīng)在3分鐘時進行，此后藍色會逐漸加深，24小時后顏色會逐漸褪去，影響準確性。

8. 質(zhì)量控制 (Quality Control)

(1)每批測定必須設(shè)一個緩沖液的空白對照卡。

(2)空白對照卡的結(jié)果是實驗有效性的前提：空白卡必須變?yōu)樘焖{色。若空白對照卡不變色，實驗無效，需檢查：

a) 藥片是否充分濕潤；

b) 環(huán)境溫度是否過低，需延長預(yù)反應(yīng)時間直至空白卡能正常變藍。

(3)樣品卡的反應(yīng)時間必須與空白對照卡完全一致。

9. 注意事項 (Precautions)

1.  溫度影響: 反應(yīng)溫度低于37℃時，酶反應(yīng)速度減慢。應(yīng)適當延長預(yù)反應(yīng)時間，延長時間以“空白對照卡捏3min能變藍”為標準確定。所有樣品卡的放置時間需與空白卡一致。

2.  濕度要求: 整個反應(yīng)過程中，白色藥片必須保持濕潤，這是實驗成功的關(guān)鍵。

3.  時效性: 速測卡應(yīng)在有效期內(nèi)使用，并按要求密封保存，避免冷藏或冷凍。

4.  局限性: 本方法為快速篩選方法，專一性強（針對有機磷和氨基甲酸酯類），但存在假陽性或假陰性可能，不能作為最終仲裁依據(jù)。